細胞膜熒光探針用于標記肌肉膜，并且通過共聚焦激光掃描顯微鏡觀察染料可接近的膜。細胞膜完整性的喪失是由收縮活性引起的，使得內膜的DiOC18（3）染色成為可能。由此產生的染色模式引人注目，細胞膜受損的纖維很容易與未受損的細胞膜區(qū)分開來。二十八烷基羰基酞菁高氯酸鹽是陽離子氧雜羰花青染料。已經在含有卵磷脂酰膽堿（PC）的水性和非水性介質以及不同性質的不同溶劑中研究了二十八烷基羰花青菁（一種陽離子氧雜羰花青染料）的吸收和熒光光譜。結果表明，在PC中，染料在地面和激發(fā)態(tài)中形成復雜的證據(jù)。染料與PC的激發(fā)態(tài)相互作用表明電子從PC轉移到染料，這是由光電化學電池在光電化學電池中產生的，光電化學電池由染料和PC在水介質中組成。

 

　　細胞膜熒光探針的樣本分析：

　　1、制備細胞膜熒光探針膜染色溶液：

　　a、制備DMSO或EtOH儲備溶液：儲備溶液應在DMSO或EtOH中以1-5mM制備；

　　b、準備工作溶液：將儲備溶液稀釋到合適的緩沖液中，如無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS，制成1至5mM的工作溶液。

 

　　2、將細胞染成懸浮液：

　　a、在染料工作溶液中懸浮細胞，細胞密度為1×106/mL；

　　b、在37°C孵育2-20分鐘，培養(yǎng)時間取決于細胞類型。首先孵育20分鐘，然后優(yōu)化以獲得均勻的標記；

　　c、將標記的懸浮管以1000至1500rpm離心5分鐘；

　　d、去除上清液，輕輕地將細胞重新懸浮在預熱（37°C）的生長培養(yǎng)基中；

　　e、按步驟c和d洗滌兩次。

 

　　3、染色貼壁細胞：

　　a、在無菌玻璃蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細胞；

　　b、從生長培養(yǎng)基中取出蓋玻片，去除多余的培養(yǎng)基。將蓋玻片放在濕度箱中；

　　c、將100μL染料工作溶液吸到蓋玻片的角落，輕輕攪拌直至所有細胞都被覆蓋；

　　d、將蓋玻片在37°C孵育2-20分鐘，培養(yǎng)時間根據(jù)細胞類型而變化。開始孵育20分鐘，然后優(yōu)化以獲得均勻的標記；

　　e、排出染料工作溶液，用生長培養(yǎng)基清洗蓋玻片兩到三次。對于每個洗滌循環(huán)，用預熱的生長培養(yǎng)基覆蓋細胞，孵育5-10分鐘，然后去除培養(yǎng)基。

 

　　4、顯微鏡檢測：

　　a、總結了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR濾波器組的選擇。

　　b、對于同時檢測多種染料，可提供如下多波段濾波器組：

　　①、DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

　?、?、DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

　?、?、DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

 

　　5、流式細胞儀檢測：

　　用細胞膜熒光探針標記的細胞可分別使用常規(guī)FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測通道進行分析。