轉(zhuǎn)染試劑操作步驟：

　　所列步驟適用于24孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考表1按照轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。大部分細(xì)胞系所使用的DNA(μg)與VigeneFection(μg)的比值為1:3或1:4，轉(zhuǎn)染狀態(tài)良好的細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒性。

　　1、貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×105個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長(zhǎng)至90-95%融合；懸浮細(xì)胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×105個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中。

　　2、轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：

　　A、用50μlDMEM培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕混勻。

　　B、取適量VigeneFection在50μlDMEM培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育5min。

　　C、將前兩步所稀釋的DNA和VigeneFection混合，輕輕混勻，室溫放置30min。

　　3、在每孔細(xì)胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。

　　4、貼壁細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后可更換培養(yǎng)基，懸浮細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染后的18-48h之間，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48h之后可檢測(cè)基因表達(dá)。如果檢測(cè)到蛋白表達(dá)，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染后24-72h收集培養(yǎng)液。

　　5、對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng)，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

 

　　轉(zhuǎn)染試劑注意事項(xiàng)：

　　推薦在混合前使用Opti-MEM（Cat.No.267485)或DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基(Cat.No.SH30022.01B)稀釋VigeneFection和核酸。

　　轉(zhuǎn)染過(guò)程中勿向培養(yǎng)基中添加抗生素，以免造成細(xì)胞死亡。

　　不同批次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)保持細(xì)胞接種條件相同。

　　轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態(tài)好壞對(duì)終的轉(zhuǎn)染效果高低影響很大，請(qǐng)務(wù)必保證轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。